Les tests de synthèse du cartilage

Le test CS-846 - Aggrécanes
(Fiche d'information en anglais seulement)

Applications cliniques

Ce test sérique permet de constater si la vitesse de synthèse des composantes du cartilage (aggrécanes) est perturbée, ce qui indique la présence de polyarthrite rhumatoïde et d'arthrose.

Physiologie

Dans les articulations arthritiques, la matrice extracellulaire de collagène est perturbée, ce qui entraîne une modification du contenu en protéoglycanes. L'anti-CS-846 détecte toute formation accrue d'aggrécanes nouvellement réparées.

Principe du test

Le test consiste à capturer des anticorps en une étape, par méthode de compétition immunoenzymatique dans une plaque de 96 puits. Les immunoglobulines de chèvre anti-souris (IgM) sont immobilisées à la base des puits par une incubation pendant la nuit. Après l'incubation, les anticorps libres sont éliminés par lavages successifs. La protéoglycane de fœtus bovin marquée à la biotine est ajoutée à tous les puits. On ajoute ensuite la solution étalon de protéoglycane de fœtus bovin non marquée ou des échantillons de sérum inconnus, dilués 1:5. L'anticorps monoclonal 846 de souris (IgM) est ajouté pour déclencher la compétition. Les plaques sont incubées pendant deux heures sur un agitateur. La compétition se fait entre les aggrécanes marquées et non marquées et les anticorps immobilisés pour la liaison à l'anticorps 846 en solution. On ajoute ensuite de la streptavidine conjuguée à la peroxydase de raifort (HRP) qui a une affinité pour la biotine utilisée comme marqueur des aggrécanes. Une solution de peroxyde contenant le chromogène tétraméthylbenzidine (TMB) est ajoutée. La peroxydase (HRP) dégrade l'H 2 0 2 , entraînant l'oxydation du TMB pour former un produit de couleur bleue. La réaction est arrêtée et le signal amplifié au moyen d'un acide qui convertit le produit de la couleur bleue à la couleur jaune pouvant se quantifier par une lecture au spectrophotomètre à 450 nm. La densité optique à 450 nm est inversement proportionnelle à la quantité d'épitope.