Héparinase II

Fiche d'information

Synonymes

L'héparitinase II

Source

Flavobacterium heparinum (recombinant)

No. d'enzyme

Non assigné

Réaction catalytique

L'enzyme segmente, par un mécanisme d'élimination, les chaînes de polysaccharides sulfatés comprenant des liaisons 1-4 entre les hexosamines et les résidus d'acide uronique (résidus d'acide iduronique et d'acide glucuronique). La réaction donne lieu à des oligosaccharides (principalement des disaccharides) contenant des acides uroniques non saturés qui peuvent se déceler à la spectroscopie UV à 232 nm. L'enzyme segmente aussi bien l'héparine que sur l'héparane-sulfate, l'activité de l'héparane-sulfate étant environ deux fois celle de l'héparine.

Spécificité des substrats

L'héparine, l'héparane-sulfate

Propriétés

• Poids moléculaire: 85,765 Da
• Point isoélectrique: 9.1 – 9.2
• pH d'activité optimale: 7 – 8
• Zone de pH d'activité: 5 – 9
• Plage de température optimale: 20°C – 37°C

Pureté

≥90% par "HPLC" en phase inversée (chromatographie liquide à
haute pression).

Activité spécifique

≥5 UI/mg, en employant l'héparane-sulfate comme substrat

Une unité internationale (UI) se définit comme étant la quantité d'enzyme qui dégagera, à partir de l'héparine ou de l'héparane-sulfate, 1.0 µmole d'oligosaccharides non saturés par minute à 30°C et à un pH de 7.5.

Stabilité

• PN 50-011 (0.5 IU/vial): 18 mois de la date de fabrication congelé à –70°C dans des tampons aqueux contenant du phosphate de sodium et du sucrose 5%.
• PN 50-011-001 (0.1IU/vial): 12 mois de la date de fabrication congelé à –70°C dans des tampons aqueux contenant du phosphate de sodium et du sucrose 5%.

Applications

• Comme réactif de recherche (dégradation des glycosaminoglycanes)

• Pour la préparation de disaccharides et d'oligosaccharides d'héparine et d'héparane-sulfate, et la préparation de banques d'oligosaccharides.

Disponibilité

Le système breveté d'extraction à partir de F. heparinum et les
procédés de fermentation et d'isolation que IBEX Pharmaceutiques a mis au point rendent possible la production de fortes quantités d'un produit de grande pureté.

Références

• "Enzymatic Degradation of Glycosaminoglycans". S. Ernst et al, Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology (1995), 30(5): 387-444.
• "Purification and Characterization of Heparin Lyases from Flavobacterium heparinum". D.L .Lohse et R.J. Linhardt , J. Biol. Chem. (1992) 267: 24347-24355.
• "Substrate Specificity of the Heparin Lyases from Flavobacterium heparinum". U.R. Desai, H. Wang et R.J. Linhardt , Archives of Biochemistry and Biophysics (1993) 306(2): 461-468.
• "Heparinase II-Catalyzed Degradation of N-Propionylated Heparin". C.F. Moffat, W.F. Long, M.W. McLean et F.B. Williamson, Archives of Biochemistry and Biophysics (1997) 338 (2): 201-206.
• "Isolation and Expression in Escherichia coli of hepB and hepC, Genes Coding for the Glycosaminoglycan-Degrading Enzymes Heparinase II and Heparinase III, Respectively, from Flavobacterium heparinum". HongSheng Su, Françoise Blain, Roy A. Musil, Joseph J.F. Zimmermann, KangFu Gu et D. Clark Bennett, Applied and Environmental Microbiology, (1996): 2723-2734.
• Brevets américains US 5,681,733 et 5,919,693. "Nucleic Acid Sequences and Expression Systems for Heparinase II and Heparinase III Derived from Flavobacterium heparinum."