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L'héparinase III
L'héparinase III segmente uniquement l'héparane-sulfate et non pas l'héparine non fractionnée ni les héparines de faible poids moléculaires.
Applications non cliniques
- Comme réactif de recherche (glycobiologie, préparation de banques d'oligosaccharides, préparation de dissaccharides à partir d'héparane-sulfate).
Applications cliniques potentielles :
L'Héparinase III segmente de manière sélective les protéoglycanes d'héparane-sulfate des surfaces cellulaires et des matrices extracellulaires, réduisant la fixation d'agents pro-inflammatoires tels que les P-sélectines, les L-sélectines et l'interleukine 8. Cette action de l'héparinase III réduit le roulement, l'adhésion et l'épanchement des leucocytes.
IBEX Pharmaceutiques a mis au point l'Héparinase III sous le nom de commerce Extravase md pour un certain nombre d'applications médicales potentielles, notamment :
- Comme protection contre une blessure de reperfusion par suite d'une ischémie.
- Pour réduire la resténose après une angioplastie.
- Pour accélérer la guérison des plaies chez les patients souffrant d'ulcères veineux.
L'application thérapeutique a été vendue à BioMarin Pharmaceuticals, de Novato en Californie.
Fiche d'information imprimable
Héparinase III
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Fiche d'information |
Synonymes
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L'héparine-sulfate éliminase, l'héparitinase I
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Source
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Flavobacterium heparinum (recombinant)
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No. d'enzyme
Numéro CAS |
E.C. 4.2.2.8
37290-86-1
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Réaction catalytique
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L'enzyme segmente de manière sélective, par un mécanisme d'élimination, les chaînes de polysaccharides sulfatés comprenant des liaisons 1-4 entre les hexosamines et les résidus d'acide glucuronique. La réaction donne lieu à des oligosaccharides (principalement des disaccharides) contenant des acides uroniques non saturés qui peuvent se déceler à la spectroscopie UV à 232 nm. L'enzyme agit seulement sur l'héparane-sulfate, et ne segmente pas l'héparine ni les héparines de faible poids moléculaire.
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Spécificité des substrats
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L'héparane-sulfate
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Propriétés
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- Poids moléculaire: 73,202 Da
- Point isoélectrique: 9.6 – 9.9
- pH d'activité optimale: 7 – 8
- Zone de pH d'activité: 5.5 – 9
- Plage de température optimale: 20°C – 37°C
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Pureté
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≥95% par "HPLC" en phase inversée (chromatographie liquide à haute pression).
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Activité spécifique
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>45 UI/mg
Une unité internationale (UI) se définit comme étant la quantité d'enzyme qui dégagera, à partir de l'héparane-sulfate, 1.0 µmole d'oligosaccharides non saturés par minute à 30°C et à un pH de 7.5.
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Stabilité
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- PN 50-012 (0.5 IU/vial): 18 mois de la date de fabrication congelé à -70°C dans des tampons aqueux contenant du phosphate de sodium et du sucrose 5%.
- PN 50-012-001 (0.1 IU/vial): 12 mois de la date de fabrication congelé à -70°C dans des tampons aqueux contenant du phosphate de sodium et du sucrose 5%.
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Applications
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- Comme réactif de recherche (dégradation des glycosaminoglycanes) .
- Pour la préparation de disaccharides d'héparane-sulfate, et la préparation de banques d'oligosaccharides .
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Disponibilité
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Le système breveté d'extraction à partir de F. heparinum et les procédés de fermentation et d'isolation que IBEX Pharmaceutiques a mis au point rendent possible la production de fortes quantités d'un produit de grande pureté.
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Références
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- "Enzymatic Degradation of Glycosaminoglycans". S. Ernst et al, Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology (1995), 30(5): 387-444.
- "Purification and Characterization of Heparin Lyases from Flavobacterium heparinum". D.L .Lohse et R.J. Linhardt, J. Biol. Chem. (1992) 267: 24347-24355.
- "Substrate Specificity of the Heparin Lyases from Flavobacterium heparinum". U.R. Desai, H. Wang et R.J. Linhardt, Archives of Biochemistry and Biophysics (1993) 306(2): 461-468.
- "Isolation and Expression in Escherichia coli of hepB and hepC, Genes Coding for the Glycosaminoglycan-Degrading Enzymes Heparinase II and Heparinase III, Respectively, from Flavobacterium heparinum". HongSheng Su, Françoise Blain, Roy A. Musil, Joseph J.F. Zimmermann, KangFu Gu et D. Clark Bennett, Applied and Environmental Microbiology, (1996): 2723-2734.
- "Heparinase III from Flavobacterium heparinum: Cloning and Recombinant Expression in Eschericia coli". R. Godavarti, M. Davis, G. Venkataraman, C. Cooney, R. Langer et R. Sasisekharan, Biochemical and Biophysical Research Communications (1996) 225: 751-758.
- "Involvement of heparan sulfate and related molecules in sequestration and growth promoting activity of fibroblast growth factor". I. Vlodavsky, H-Q. Miao, P. Danagher et D. Ron, Cancer and Metastasis Reviews (1996) 15(2): 177- 186.
- "Control of Cell Proliferation by Heparan Sulfate and Heparin- Binding Growth Factors". I. Vlodavsky, H-Q. Maio, R. Atzmon, E. Levi, J. Zimmermann, R. Bar-Shavit, T. Peretz et S. Ben-Sasson, Thrombosis and Haemostasis (1995) 74(1): 534-540.
- "Heparinase III Exerts Endothelial and Cardioprotective Effects in Feline Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury". R. Hayward, T.O. Nossuli et A.M. Lefer, J. Pharmacology and Experimental Therapeutics (1997) 283: 1032-1038.
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