Synonymes

L'héparinase, l'héparine lyase, l'héparine éliminase

Source

Flavobacterium heparinum (recombinant)

No. d'enzyme

Numéro CAS

E.C. 4.2.2.7

9025-39-2

Réaction catalytique

L'enzyme segmente de manière sélective, par un mécanisme d'élimination, les chaînes de polysaccharides fortement sulfatés comprenant des liaisons 1-4 entre les hexosamines et les résidus d'acide iduronique O-sulfatés. La réaction donne lieu à des oligosaccharides (principalement des disaccharides) contenant des acides uroniques non saturés qui peuvent se déceler à la spectroscopie UV à 232 nm. L'enzyme segmente aussi le domaine pentasaccharide de fixation de l'antithrombine III dans la molécule de l'héparine.

Spécificité des substrats

L'héparine, l'héparane-sulfate (l'activité spécifique avec l'héparine est approximativement 3 fois plus élevée qu’avec l'héparane- sulfate).

Propriétés

• Poids moléculaire: 42,508 Da
• Point isoélectrique: 9.3 – 9.5
• pH d'activité optimale: 6.5 – 7.5
• Zone de pH d'activité: 4 – 9
• Plage de température optimale: 20°C – 37° C

Pureté

≥95% par "HPLC" en phase inversée (chromatographie liquide à haute pression).

Activité spécifique

>90-110 UI/mg d'après la définition suivante d'une unité.

Une unité internationale (UI) se définit comme étant la quantité d'enzyme qui dégagera, à partir d'une héparine de muqueuse porcine, 1.0 µmole par minute d'oligosaccharides non saturés à 30°C et à un pH de 7.0.

Une unité (U) se définit aussi comme suit dans une autre préparation: 1 U formera 0.1µmole par heure d'acide uronique non saturé, à 25°C et à un pH de 7.5;1 IU est équivalent à 600 U.

Stabilité

• PN 50-010 (vial de 0.5 IU): La date d'expiration est 30 mois après la date de fabrication, congelé à -70°C dans un tampon aqueux contenant du chlorure de sodium, du phosphate de sodium et du sucrose 5%.

• PN 50-010-001 (vial de 0.1 IU): La date d'expiration est 30 mois après la date de fabrication, congelé à -70°C dans un tampon aqueux contenant du chlorure de sodium, phosphate de sodium et du sucrose 5%.

Applications

• Pour la neutralisation de l'héparine dans des prélèvements sanguins et plasmatiques, préalablement à une analyse.
  
  
• De la même manière, pour la neutralisation in vitro d'héparines de faible poids moléculaire.
  
  
• Comme partie intégrante des tests de diagnostic in vitro, afin de neutraliser l'héparine (tests de coagulation, tests plaquettaires).
  
  
• Dans les tubes de prélèvement sanguin, afin de neutraliser l'héparine.
  
  
• Pour la préparation d'héparines de faible poids moléculaire à partir d'héparine non fractionnée.
  
  
• En tant que réactif de recherche (dégradation des glycosaminoglycanes).

• Pour la préparation des disaccharides à partir d'héparine et la préparation de banques d'oligosaccharides.

Disponibilité

Le système breveté d'extraction à partir de F. heparinum et les procédés de fermentation et d'isolation que IBEX Pharmaceutiques a mis au point rendent possible la production de fortes quantités d'un produit de grande pureté.

Références

• Revue: "Enzymatic Degradation of Glycosaminoglycans". S. Ernst et al., Critical Reviews in Biochemistry and Molecular Biology (1995), 30(5): 387-444.

• "Purification and Characterization of Heparin Lyases from Flavobacterium heparinum". D.L. Lohse et R.J. Linhardt, J. Biol. Chem. (1992) 267: 24347-24355.

• "Purification and Characterization of Heparinase from Flavobacterium heparinum". V.C.Yang, R.J. Linhardt, H. Bernstein, C.L. Cooney et R. Langer, J. Biol. Chem. (1985) 260(3): 1849-1857.
  
  
• "Substrate Specificity of the Heparin Lyases from Flavobacterium heparinum". U.R.Desai, H.Wang et R.J. Linhardt, Archives of Biochemistry and Biophysics (1993) 306(2): 461-468.
  
  
• "Heparinase I from Flavobacterium heparinum. Mapping and Characterization of the Heparin Binding Domain". R. Sasisekharan, G. Venkataraman, R. Godavarti, S. Ernst, C.L. Cooney et R. Langer, J. Biol. Chem . (1996) 271 (6): 3124-3131.
  
  
• "Cloning and Expression of Heparinase I Gene from Flavobacterium heparinum". R. Sasisekharan, M. Bulmer, K.W. Moremen, C.L. Cooney et R. Langer, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993) 90: 3660-3664.
  
  
• "Neutralase (Heparinase I) as a Potential Heparin Reversal Agent in Coronary Artery Bypass Surgery". P.J. Silver, Management of Bleeding in Cardiovascular Surgery, édité par R. Pifarré, MD, (2000) Hanley & Belfus, Inc., Philadelphie, PA.
  
  
• "The effects of heparinase I and protamine on platelet reactivity". T. Ammar et C.F. Fisher, Anesthesiology (1997) 86: 1382-1386.
  
  
• "Heparinase I (Neutralase) Reversal of Systemic Anticoagulation". L.G. Michelsen, M. Kikura, J.H. Levy et al, Anesthesiology (1996) 85: 339-346.
  
  
• "Neutralase Reverses the Anti-coagulant but not the Anti-thrombotic Activity of Heparin in a Rabbit Model of Venous Thrombosis". P.J. Silver, R. Broughton, J. Bouthillier et al, Thromb. Res. (1998) 91: 143-150.